數(shù)字PCR技術靈敏度高、可精準定量。那些多次采用實時熒光定量PCR方式進行核酸檢測，結(jié)果卻為陰性的病毒攜帶者，利用數(shù)字PCR技術就能準確地檢測出他們是陽性患者。

　　◎本報記者 華 凌

　　春節(jié)前后，國內(nèi)外新冠肺炎疫情仍在持續(xù)。當前肆虐的奧密克戎毒株，雖然引發(fā)的癥狀相對較輕，但其基因突變位點多，傳播速度快，不易被發(fā)現(xiàn)，在多地成散發(fā)態(tài)勢。因此，針對奧密克戎的核酸檢測試劑，靈敏度要非常高。

　　近日，由清華大學醫(yī)學院生物醫(yī)學工程系教授郭永團隊與北京新羿生物科技有限公司（以下簡稱新羿生物）等多家單位，采用數(shù)字PCR技術聯(lián)合研發(fā)的新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒（熒光PCR法），正式獲得國家藥品監(jiān)督管理局（NMPA）醫(yī)療器械批文。

　　據(jù)悉，這是NMPA首個基于數(shù)字PCR技術的新冠檢測試劑批文。該試劑盒也是全球首個經(jīng)評審后正式獲批的將數(shù)字PCR技術運用于感染性疾病領域的檢測產(chǎn)品。這意味著，在與新冠病毒的“戰(zhàn)斗”中，人類有了更精準的病毒檢測“神器”。

　　數(shù)字PCR技術是核酸檢測的標尺

　　2020年，新冠肺炎疫情暴發(fā)初期，核酸檢測試劑盒缺乏、患者確診困難等難題亟待解決，郭永敏銳地覺察到，由于新冠病毒低病毒載量樣本的存在，對于高靈敏度的核酸檢測有著迫切需求。靈敏度不夠或定量不準確，都可能會影響樣本陰陽性的判讀，造成漏判或誤判。

　　“PCR即聚合酶鏈反應，是一種在生物體外進行脫氧核糖核酸（DNA）復制的技術手段，它可以將生物體中含量微小的遺傳物質(zhì)如核酸分子等復制擴增為原有數(shù)量的近百億倍，從而實現(xiàn)核酸分子的超敏檢測和精準定量。”郭永介紹。

　　得益于PCR技術，無論是化石中的古生物、歷史人物的殘骸，還是幾十年前的案件中嫌疑人所遺留的毛發(fā)、皮膚或血液，只要能分離出一丁點的DNA，就能用PCR技術加以放大，進行比對。自20世紀80年代問世以來，PCR技術幾經(jīng)更迭，到目前實時熒光定量PCR（qPCR）技術已成為臨床上分子診斷的主打技術。

　　然而，由于qPCR技術需要大體積反應系統(tǒng)，存在較多的背景干擾，且無法獲得絕對定量結(jié)果。隨著臨床檢測要求的提高，qPCR技術不能滿足臨床一些超高靈敏度、高精密度的檢測要求，臨床上急需新的檢測技術。為此，近10年來，被稱為“第三代PCR技術”的數(shù)字PCR技術開始迅速發(fā)展。

　　郭永介紹，“數(shù)字PCR技術的原理，就是把一份反應液樣本，分散成幾萬個極微小的液滴，每個小液滴所在的反應單元都包含零個、一個或多個拷貝的目標核酸分子，這些小液滴同時進行PCR擴增，最后通過計算熒光液滴數(shù)目，就可以計算出原來的反應液當中有多少個目標核酸分子的拷貝數(shù)目了。”

　　郭永指出，“靈敏度高、可精準定量這兩大優(yōu)勢讓數(shù)字PCR技術在傳統(tǒng)方法難當重任時可‘挺身而出’，特別是在新冠病毒的核酸檢測中，那些多次采用qPCR技術方式進行核酸檢測，結(jié)果卻為陰性的病毒攜帶者，數(shù)字PCR技術卻能準確地檢測出他們是陽性患者。從這個意義上來說，數(shù)字PCR技術可謂是核酸檢測的標尺。”

　　“此次獲批上市的新冠病毒檢測數(shù)字PCR試劑盒，是在之前qPCR技術即第二代PCR技術的基礎上，借助微流控生物芯片，數(shù)字化顯示新冠病毒的拷貝數(shù)，極大地提升了核酸檢測的‘信噪比’。其靈敏度可達100拷貝/毫升。”郭永表示。

　　新羿生物聯(lián)合創(chuàng)始人楊文軍博士說，在實際應用中，這個試劑盒有效提高了檢測靈敏度，可以降低陽性漏檢情況。此外，這個“嗅覺”靈敏的“新冠探測器”對包括德爾塔株和奧密克戎株等在內(nèi)的目前全球范圍內(nèi)常見的15種變異株，均不會出現(xiàn)漏檢和脫靶。哪怕是樣本中僅有微量的新冠病毒，也難逃它的法眼。“數(shù)字PCR技術為新冠肺炎疫情防控與核酸檢測提供了更精準的利器。”楊文軍說。

　　目前，數(shù)字PCR新冠檢測試劑盒已進入商務部抗疫出口物資白名單。

　　國內(nèi)企業(yè)開啟全鏈條式自主研發(fā)

　　數(shù)字PCR技術是生命科學和臨床診斷的關鍵技術，更是核酸檢測領域的上游技術，以前我國一直依靠國外引進。

　　近年來,國內(nèi)誕生的十余家數(shù)字PCR研發(fā)企業(yè)使這個市場迸發(fā)出新的生命力，以新羿生物為代表的一批新銳企業(yè)異軍崛起，包括領航基因科技（杭州）有限公司（以下簡稱領航基因）、蘇州銳訊生物科技有限公司、思納福醫(yī)療科技有限公司（以下簡稱思納福醫(yī)療）等在內(nèi)的數(shù)字PCR研發(fā)企業(yè)也開始與國外企業(yè)同臺競技，大力推進數(shù)字PCR技術及其產(chǎn)品的國產(chǎn)化進程，打破了進口壟斷。

　　2019年1月7日，浙江省藥品監(jiān)督管理局正式批準領航基因的生物芯片閱讀儀iScanner 5上市。該產(chǎn)品是領航基因繼2018年6月獲批國內(nèi)首款擁有完全獨立自主知識產(chǎn)權的固態(tài)芯片式數(shù)字PCR儀之后，推出的全新五色熒光液滴數(shù)字PCR系統(tǒng)，大幅提升了數(shù)字PCR的多色熒光技術水平。此次獲批，標志著我國數(shù)字PCR臨床轉(zhuǎn)化走在了國際前列。

　　2020年，思納福醫(yī)療推出了全自動化數(shù)字PCR產(chǎn)品，這是首款國產(chǎn)一體化數(shù)字PCR儀，也是全球第三款上市的全自動化數(shù)字PCR產(chǎn)品，該產(chǎn)品將我國數(shù)字PCR技術提升到了國際頂尖水平。

　　“只有與專業(yè)團隊強強聯(lián)合，通過自主研發(fā)將核心技術掌握在自己手里，才能在激烈競爭中掌握主動權。”楊文軍表示，新羿生物與清華大學等聯(lián)合研發(fā)的數(shù)字PCR系統(tǒng)從核心原材料、芯片、儀器、軟件到臨床檢測試劑，整個檢測鏈條的各個環(huán)節(jié)，均為自主研發(fā)成果。

　　據(jù)介紹，該團隊研發(fā)的數(shù)字PCR系統(tǒng)包含樣本制備儀和生物芯片分析儀，一次可以完成96個樣本的檢測，且無須手工移液，樣本擴增完成后，直接放入生物芯片分析儀中，即可進行信號讀取與分析。這兩款產(chǎn)品分別于2017年、2019年獲批。同時，針對不同病癥和用途，團隊還研發(fā)了不同的檢測試劑，通過“儀器+試劑”相互配合的方式，打出數(shù)字PCR檢測的“組合拳”，目前已開發(fā)出20多種檢測試劑。

　　將在重大疾病檢測上發(fā)揮作用

　　“實際上，感染性疾病正是數(shù)字PCR技術應用的一大理想場景，它可用于新冠肺炎、乙肝、結(jié)核、艾滋病等比較重大的感染性疾病的早期和快速診斷。此外，數(shù)字PCR技術還可在腫瘤基因檢測、無創(chuàng)出生缺陷篩查兩大應用場景中發(fā)揮用武之地。”楊文軍介紹。

　　比如，我國肺癌病人基數(shù)比較龐大，且治療藥物也較多，患者的用藥與其基因檢測結(jié)果直接相關，傳統(tǒng)切片需要取樣后再做病理診斷，現(xiàn)在血液檢測取樣會更方便，而且數(shù)字PCR設備的檢測靈敏度也更高。

　　“至于無創(chuàng)出生缺陷篩查，以往更多依賴基因測序技術進行。”楊文軍說，“而且基因測序主要是在大城市的大醫(yī)院進行，到小城市推廣相對困難，而數(shù)字PCR設備操作簡單、成本更低，市場下沉更有優(yōu)勢。”

　　據(jù)了解，基于數(shù)字PCR技術，我國已在腫瘤、出生缺陷和重大感染性疾病診斷方面開發(fā)了一系列新型分子診斷產(chǎn)品。

　　楊文軍表示：“今后對于這三大臨床應用領域，這些產(chǎn)品會涵蓋一線需求，解決一些行業(yè)痛點。”